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Equipements et techniques remarquables

Criblage haut débit de souches


Afin de sélectionner les souches d'intérêt, le laboratoire a mis point deux méthodes de criblage. La première discimine sur la composition en lipides, la deuxième, sur l'activité photosynthétique de l'organisme.
Publié le 6 novembre 2019

​Criblage d'une banque de mutants sur la composition en lipides

 

​Etape 1 :

Constitution des banques de mutants 
                             

Crédit : G. Lesénéchal/CEA

Etape 2 :

Culture cellulaire








Crédit : Stéphan Cuiné/CEA
​En microplaques de 96 puits

​Etape 3 :

​Criblage
des cellules









Crédit : CEA
Criblage des cellules accumulatrices de TAG par cytomètrie en flux Utilisation d'un marqueur lipophile fluorescent: le Nile Red.

​Etape 4 :

​Validation
par HPTLC



Crédit : CEA
 (High Performance Thin Layer Chromatography) Extraction des lipides en microplaque.

​Etape 5 :

Evaluation des profils lipidiques

Crédit : CEA

par GC-FID ou GC-M

 

Publication référence de la méthode de criblage :

Cagnon C, Mirabella B, Nguyen HM, Beyly-Adriano A, Bouvet S, Cuiné S, Beisson F, Peltier G, Li-Beisson Y. A genetic screen to isolate oil mutants in the green microalga Chlamydomonas reinhardtii . Biotechnol. Biofuels 6, 178

 

 

Criblage d'une banque de mutants sur la fluorescence de la chlorophylle

Crédit : Bernard Genty/ CEA


Un système permettant de suivre la fluorescence de la chlorophylle au cours du temps, sur boite de culture a été mis au point avec la collaboration de Bernard Genty et Illia Reiters (P&E- CEA Cadarache).

Ce dispositif basé sur l’acquisition par une caméra fluo du signal de fluorescence et d’une

excitation par une couronne de diodes a permis de cribler une banque de plus de 3000 mutants de Chlamydomonas afin d’isoler des mutants de la photosynthèse (Ghysel et al.).