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Plateforme Histologie et Analyses microscopiques (PH@M)

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​Immunohistochemistry and anatomopathology

La plateforme d'histologie et d'analyses microscopiques (PH@M) propose son expertise dans l'analyse histopathologique de modèles animaux des maladies neurodégénératives.

PH@M réalise ainsi des études histologiques en assurant toutes les étapes, allant du prélèvement et conditionnement des échantillons biologiques (confinement A1, A2 et A3) à l'analyse qualitative et quantitative des données microscopiques, sur du tissus humain et sur des modèles animaux de pathologies développés chez le primate non humain (macaque et microcèbe) et le rongeur (souris et rat).

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Contact plateforme : Histo-MIRCEN@cea.fr

Publié le 4 mai 2023

Activités - prestations

L'équipe assure la réalisation et le développement de différentes techniques d'histologie et d'analyses microscopiques.

Les études sont réalisées dans le cadre de différents projets avec un focus particulier sur :

  • évaluation et caractérisation de modèles animaux de pathologies neurodégénératives
  • évaluation de l'efficacité, de la biodistribution et de l'innocuité de thérapies en développement (médicaments, cellules souches, vecteurs viraux, …)



techniques réalisées 


1.histologie


  • Prélèvements et préparations des échantillons (fixation et/ou congélation des tissus)
  • Coupes histologiques via différents équipements permettant de réaliser des coupes de tissus, fixés et/ou congelés (vibratome, microtome, cryostat)
  • Marquages en immunohistochimie et immunofluorescence, simples ou en co-marquage
  • Colorations histochimiques, pour permettre l'observation des détails structuraux dans un tissu
  • Marquages histoenzymologiques, permettant de visualiser une activité enzymatique
  • Hybridation in situ, permettant de visualiser dans un tissu la présence ARN spécifiques à l'intérieur d'une cellule
  • Immunomarquage et transparisation des échantillons biologiques (iDISCO)


2.Numérisation et analyse


  • L'acquisition d'images des tissus peut être macroscopique ou microscopique. La numérisation se fait à l'unité (lame) ou à haut débit.
  • L'analyse des coupes histologiques est réalisée, en direct ou après numérisation, sur des stations d'analyse performantes et à l'aide de logiciels de traitement et d'analyse d'image dédiés.
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Equipements

PH@M est équipée du matériel nécessaire à l'observation et l'analyse immunohistologique de tissus humains, primate non humain et murins.

1.Prélèvement


  • Tables de perfusion / prélèvement à aspiration (Niveau A1, A2 et A3)
  • Pompes péristaltiques pour la perfusion de fixateur


2.Microtomie


La plateforme est dotée de divers équipements pour la réalisation de coupes de tissus fixés et/ou congelés, de différentes tailles et de différentes épaisseurs.

  • Cryostats Leica CM 3050S (épaisseur 10-20µm)
  • Microtomes Leica SM 2400 munis de platines réfrigérantes (épaisseur 30-40µm)
  • Vibratome Leica VT1000S (épaisseur 50-100µm)
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3. Imagerie


La plateforme bénéficie de systèmes de macroscopie, de microscopie de plein champ et confocale, ainsi qu'un scanner de lame à haut débit.

  • Microscopes en fond clair et en fluorescence (Leica Z16 APO)
  • Microscopes motorisés en fond clair et en fluorescence (LEICA DM6000 - Zeiss AxioPlan Imaging)
  • Microscope confocal (Leica SP8)
  • Scanner de lames en fond clair et en fluorescence (Zeiss Axio Scan.Z1)

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4. Analyses d'images

Différents outils logiciels sont utilisés en fonction des besoins (acquisition d'images en mosaïque, détection automatique d'objets par seuillage, comptage de cellules par stéréologie, analyse d'images en 3D, etc.).


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